蛋白质表达模式、共同表达与空间关系的多重免疫组化

多重免疫组织化学(IHC)是一种利用单一抗原染色的基本概念同时检测多个标记物的检测方法。它可实现对过氧化物酶、碱性磷酸酶和其他偶联的一抗或二抗的标记,并可使用多种常见方法来实现,包括间接或直接染色方案。

作者:

Shayna Donoghue | 体外操作助理科学家 - IHC

日期:

2018年4月

 

多重免疫组织化学(IHC)是一种利用单一抗原染色的基本概念同时检测多个标记物的检测方法。它可实现对过氧化物酶、碱性磷酸酶和其他偶联的一抗或二抗的标记,并可使用多种常见方法来实现,包括间接或直接染色方案。

由于同时使用多种抗体具有诸多优势,研究人员一直将注意力集中在多重IHC上。它使我们可以一次收集更多数据,同时节省宝贵的组织样本。可以获取一个蛋白质靶标相对于另一个蛋白质靶标,以及与附近的组织结构或细胞器成比例的空间数据。它通常用于确定肿瘤中免疫肿瘤学标记物的子集,从而让我们深入了解肿瘤环境中发生的情况。多重IHC也已成为确定细胞中标记物共表达的重要解决方案。

 

图1:CT26肿瘤中的CD3(粉色)、CD4(绿色)和DAPI(蓝色)染色。
图1:CT26肿瘤中的CD3(粉色)、CD4(绿色)和DAPI(蓝色)染色。

 

多重IHC可以使用多种方案完成,其中许多方案遵循与单抗体染色方法相同的概念。其中一种方法可以包括间接IHC的不同变体。根据测定法的设计,可以使用相同或不同的宿主抗体以及与荧光团偶联的第二抗体来完成间接多重IHC。辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)偶联的二抗也可用于检测具有不同色原的多种标记物。由于多种第二抗体可以与一种第一抗体结合,因此信号被放大,从而使低表达蛋白更加容易被发现。

另一种可以使用的方法是直接法。虽然也可以使用相同的宿主或不同的宿主一抗完成直接检测,但它在测定设计中提供了更大的灵活性。在开始下一步之前,无需完成每个标记物的染色过程,也无需在整个过程中采用多种类型的阻断技术。直接检测在蛋白质标记方面也很灵活,因为一抗可以与辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标签结合。

图2:CT26肿瘤中的CD3(粉色)、CD4(绿色)、CD45(红色)和DAPI(蓝色)染色。
图2:CT26肿瘤中的CD3(粉色)、CD4(绿色)、CD45(红色)和DAPI(蓝色)染色。

 

科文斯现提供与偶联抗体的多达四种颜色的多重检测,而且正在不断努力验证新的多重检测方案,例如色原检测。我们已研发出在Bond RXm自动染色仪上实现一致染色的优化方案以及在Aperio VERSA扫描仪上获得数据高分辨率图像的优化方案。 联系科文斯,详细了解对多重IHC的定制标记物需求以及我们的其他IHC服务


 

注意:研究是根据适用的动物福利法规在AAALAC认可的研究中心进行的