使用新型CompDC™测试套组通过流式细胞术进行全面的树突状细胞分析

为了满足小鼠临床前模型中对稳健的全面DC免疫表型分析日益增长的需求,科文斯配置了一个新的标准测试套组CompDC™。在这篇技术文章中,我们将演示如何使用此测试套组分析肿瘤和其他组织来源的细胞样品中的各种DC亚组。

作者:

David Draper博士 | 科研助理总监

日期:

 2019年2月

 

T细胞介导的抗肿瘤反应取决于呈递肿瘤相关抗原(TAA)并向T细胞提供共刺激信号的抗原呈递细胞(APC)的活性。这转而激活了肿瘤特异性T细胞,触发了这些细胞的扩增和趋化,使其发挥作用。树突状细胞(DC)是在此过程中发挥重要作用的专门APC。DC可以被激活以表达大量的共刺激配体,并使抗原内在化并向CD4+和CD8+ T细胞呈递免疫显性肽。利用DC功能的新型疗法的研发是一个得到深入研究的领域。为了促进这些研究并满足对小鼠临床前模型中稳健的全面DC免疫表型分析日益增长的需求,科文斯配置了一个新的标准测试套组CompDC™。在这篇技术文章中,我们将演示如何使用此测试套组分析肿瘤和其他组织来源的细胞样品中的各种DC亚组。

有关不同DC亚群及其癌症生物学功能的一般介绍,请阅读我们最近发表的博客“有关树突状细胞生物学和使用同源免疫肿瘤模型进行分析的简介”

CompDC™测试套组使研究人员能够确定体内治疗是否影响肿瘤、引流淋巴结(LN)或其他组织室中不同DC亚群的丰度和激活状态。它是一种结合了一组抗体的12色测试套组,这些抗体在经过适当检查后可描绘出不同的DC亚组,并提供有关DC T细胞活化潜能(表1)的深度见解。通过精心设计的设门策略,该测试套组首先通过排除门排除巨噬细胞、粒细胞和B细胞,从而提高DC分析的精确度。此过程最大程度地降低了由于不相关或自体萤光细胞污染而造成DC分析受到影响的风险。然后使用CD24表达帮助描述常规的DC亚群,这些亚群通常按照CD11c和II类MHC由中到高的表达水平进行分类。这些常规DC包括CD103+/CD8+ DC1亚群和CD11b+ DC2亚群(图1A),其经过证明可以驱动CD8+和CD4+ T细胞抗肿瘤反应。[1] XCR1表达被多个小组记录为具有交叉呈递活性的DC标记物,DC是CD8+ T细胞的DC介导活化所需的表型。[2] 图1B和1C展示了B16-F10肿瘤来源的细胞和引流淋巴结中的XCR1+ DC分析。如图所示,XCR1表达式通常与DC1亚群相关。最后,测量成熟标记物CD80和CD86的表达以评估DC的T细胞共刺激潜力。图1D显示在B16-F10黑色素瘤肿瘤中这些标记物在DC上的表达水平相对较低,表明肿瘤微环境(TME)赋予DC的免疫抑制作用。

  

抗体/染料 描述
CD45 泛免疫细胞标记物

F4/80、Ly-6G、CD19

巨噬细胞、粒细胞和B细胞排除门
CD11c 树突状细胞标记物
CD24 树突状细胞标记物
CD8 DC1标记物
MHC II类 树突状细胞标记物/成熟标记物
CD103 DC1标记物
CD11b DC2标记物
XCR1 交叉呈递/迁移树突状细胞标记物
CD80 成熟标记物
CD86 成熟标记物
活性染料 死细胞排除
通过分别替换Ly-6C/CD206和Siglec-H抗体,可以定制CompDC™以分析炎性DC(InfDC)和浆细胞样DC亚群。

图1:使用MI-CompDC™测试套组分析DC亚群。
图1:使用CompDC™测试套组分析DC亚群。B16-F10黑素瘤肿瘤来自小鼠。肿瘤来源细胞(A)中的DC1和DC2亚群分析、肿瘤(B)CD103+ DC1细胞中的XCR1表达和来自B16-F10荷瘤小鼠(C)的淋巴结(LN)。共刺激标记物CD80和CD86在全部肿瘤来源DC中的表达(D)。红色峰代表靶标染色的细胞。蓝色峰代表未染色的阴性对照。

 

CompDC™还可以定制以分析另外两个DC亚群。其中包括炎症性DC(infDC),可通过替代抗CD206和抗Ly-6C抗体来完成。已证明InfDC可以促进抗肿瘤活性,并且可以CD11c+MHCII+CD11b+CD206+细胞的形式从单核细胞衍生的抑制细胞(M-MDSC)门中划出(图2A)。[3]浆细胞样DC(pDC)也可以通过替代抗Siglec-H抗体来定量测量。虽然TME中的pDC功能尚未完全表征,但许多报告表明这些pDC可能功能受损,甚至可以对抗肿瘤反应产生免疫抑制作用。[4] pDC通常具有低水平的CD11c表达,并且对Siglec-H呈阳性,如图2B所示。

  

图2:通过定制CompDC™测试套组实现对infDC和pDC亚群的分析。 (A) B16-F10肿瘤来源细胞的infDC分析。 (B) CT26大肠癌肿瘤来源细胞的pDC分析。
图2:通过定制CompDC™测试套组实现对infDC和pDC亚群的分析。(A) B16-F10肿瘤来源细胞的infDC分析。(B) CT26大肠癌肿瘤来源细胞的pDC分析。

 

如要详细了解CompDC™测试套组以及如何将其纳入您的研究,请联系科文斯科学家

1Gardner, A.和Ruffell, B. (2016)。树突状细胞与癌症免疫。 免疫学趋势37(12), 855-865。

2Wylie, B.、Seppanen, E.、Xiao, K.、Zemek, R.、Zanker, D.、Prato, S., … 和Waithman, J. (2015)。迁移性XCR1+ CD103−和XCR1+ CD103+树突状细胞对皮肤黑色素瘤抗原的交叉呈递。 《Oncoimmunology》, 4(8), e1019198。

3Kuhn, S.、Yang, J.和Ronchese, F. (2015)。单核细胞衍生的树突状细胞对于局部免疫治疗后的CD8+ T细胞活化和抗肿瘤反应至关重要。 Frontiers in immunology6, 584。

4Mitchell, D.、Chintala, S.和Dey, M. (2018)。免疫和癌症领域的浆细胞样树突状细胞。 《神经免疫学杂志》。

 

注意:研究是根据适用的动物福利法规在AAALAC认可的研究中心进行的