体外肿瘤学

获取全套分子和细胞生物学测定法,以满足在进行体内实验之前、期间及之后对靶标和药物活性进行分析的重要需求。现成的测试以及定制检测方法任您选择。您还可以与流式细胞术团队合作,该团队使用标准的免疫表型测试套组、磷酸化检测、功能测定和定制抗体测试套组提供从基础到全面的免疫分析。

蛋白质表达分析

ELISA
人类IL-6标准曲线

 

我们有一个带红移位PMT的Synergy 2酶标仪、一个Cytation 3酶标仪(包含可测量各种波长的单色仪),以及一个405LS微孔板洗板机以减少洗涤不彻底或不均匀的情况。我们在使用多家供应商的ELISA以及多种样本类型(例如培养的细胞、全血、新鲜组织和冷冻组织)方面拥有丰富的经验。基于吸光度或基于荧光的ELISA试剂盒可用于生成标准曲线并准确量化样本中特定蛋白质的量。为了获得最准确的结果,我们通常用一式两份或一式三份的蛋白质标准品生成标准曲线,并对来自三个复孔的每个样本中的目标蛋白质进行定量。

酶联免疫斑点/荧光耦联免疫斑点
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我们的体外服务现在提供夹心酶联免疫斑点法(酶联免疫斑点或荧光耦联免疫斑点)测定法,以测量细胞悬液中分泌细胞因子的细胞的频率。  该测定法允许分泌的细胞因子结合覆盖的抗体,从而产生单个斑点。CTL S6通用分析仪用于捕获高质量图像并分析斑点。  配备了四个光学滤镜,CTL分析仪能够使用比色或荧光读数同时检测多达三种分析物。  酶联免疫斑点或荧光耦联免疫斑点试剂盒可用于检测血液、淋巴液和实体组织。  样本通常一式两份或一式三份进行以获得平均值,以量化每个样品中的斑点数量。

蛋白质印迹分析
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我们与客户携手合作,针对大量与肿瘤相关的靶标进行了多次成功的蛋白质印迹分析。工作人员在对多种样本类型进行蛋白质印迹分析方面拥有丰富经验,例如培养的细胞、新鲜组织和冷冻组织。借助Typhoon成像系统可以检测出化学发光、化学荧光和荧光二抗,从而可以一次鉴定多种目标蛋白。我们还可以使用ImageQuant软件对膜上的条带进行定量,从而确定每个样本的每个条带的大小和相对强度。

流式细胞计量术
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我们有两台Attune NxT流式细胞仪,带有四个能够检测14个通道中的荧光化合物的激光器。无论您是需要检查细胞表面或细胞内的特定蛋白质或多种蛋白质的丰度,我们的流式细胞仪专家以及Attune NxT都可以帮助您实现目标。监测随着治疗特定蛋白质往/来细胞质膜的丰度或定位,或比较不同细胞系或小鼠品系中蛋白质的水平。将特定蛋白质的检测与我们其他任何常见的流式细胞术细胞代谢过程测定法(如下)(例如凋亡、细胞周期或细胞活性测定法)相结合,以确定蛋白质的丰度是否在细胞代谢过程的不同阶段发生变化。我们已经成功在样本中检测了数百种不同的蛋白质,例如培养的细胞、血液、组织和器官。在血液中,我们成功使用免洗免裂解检测技术检测了蛋白质,从而减少了操作量并且只需分析极少量的血液。了解有关我们流式细胞仪服务的更多信息。

流式微珠阵列术
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我们还拥有Luminex® 100™系统。该系统是一种基于流式细胞仪原理的灵活分析仪。该系统使您能够使用很小的样本量在单个微孔板中同时检测(同时测量)多达100个分析物。该系统以多种测定形式提供快速且具有成本效益的生物测定结果,包括核酸测定、受体配体测定、免疫测定和酶促测定。可以使用商用预制多重测定板来测量整个细胞信号传导途径或细胞因子,例如AKT途径、凋亡、趋化因子、细胞因子、炎性细胞因子、生长因子和TH1/TH2途径。

免疫组织化学
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使用IHC染色来分析组织样本,以检测异常细胞,例如癌性肿瘤中发现的细胞。特定的分子标记物是增殖或细胞死亡(细胞凋亡)等特定细胞事件的特征。IHC还被广泛用于基础研究,以了解生物标记物和差异表达蛋白在生物组织不同部位的分布和定位。我们提供一整套内部组织学和IHC服务,包括定制工作,并会定期添加标记物。我们的服务包括:

  • 测试套组:癌症、免疫肿瘤学
  • 正常组织、肿瘤、异种移植、细胞系、验证、免疫荧光、免疫细胞化学、多重

免疫组织化学和经过验证的标记物

荧光显微镜
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我们有一台Olympus CKX53F倒置荧光显微镜,可查看活细胞中的荧光化合物/蛋白质;还有一台BioTek Cytation 3成像多模式检测仪,可查看活细胞或固定细胞中的荧光化合物/蛋白质。通过在活细胞上使用荧光显微镜,我们可以快速确定含有荧光化合物或蛋白质的细胞的百分比,而无需对细胞进行操作。对于固定细胞,在用荧光标记的抗体染色并使用荧光染料(例如DAPI、FM 1-43、钙黄绿素或DiOC6)染色后,我们可以确定细胞内特定蛋白质的细胞定位以定义细胞内的特定区室。


DNA / RNA表达分析

实时PCR
扩增曲线图

我们使用StepOnePlus™实时PCR系统,该系统可以在96孔板上读取四种不同的颜色,并支持SNP基因分型、基因表达分析、microRNA表达、易位分析和基因检测等检测。我们的PCR专家可以帮助您确定培养细胞、新鲜组织或冷冻组织中特定基因的表达。无论您是需要测量不同细胞系、小鼠、组织或肿瘤中不同基因的表达,还是需要通过不同治疗方法监测不同基因的表达,我们的PCR专家都可以帮助您设计适合您的研究。

细胞系STR分析

某些细胞系的遗传不稳定性可能会导致DNA水平发生变化,从而影响研究结果。通过STR(短串联重复序列)分析对细胞系​​进行鉴定可确保对正确的细胞进行研究,从而最大程度地取得可靠结果,支持发表工作,并降低时间和资源浪费风险。通过将STR结果与已发布来源中的结果进行比较来鉴定您的细胞系。应当为新产生的细胞系建立STR谱,以便比较将来的STR谱,并监测DNA的稳定性。我们与专长于STR谱分析技术和分析的合作伙伴实验室合作。

细胞系与肿瘤基因表达谱分析

基因表达谱分析是指一次测量成千上万个基因的活性(表达)以创建细胞功能的全局图。使用下一代测序技术对RNA进行测序、定量,并与来自特定基因的数千种已知RNA序列进行比对。这些图谱可以区分活性分裂的细胞、显示细胞对特定治疗的反应或确定哪些基因在不同细胞系、小鼠品系、组织或肿瘤中差异表达。科文斯与专长于RNA测序的合作伙伴实验室开展合作。一旦获得测序信息,我们就可以使用该软件来量化、比对和分析数据。我们可以比较单个基因的表达、相关基因集、通路特异性或过程特异性基因组以及样本之间的整个基因组,并以简单的图形和数字显示比较结果。


细胞代谢过程

通过流式细胞仪检测细胞凋亡
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凋亡是正常的生理过程,其程序的特征在于某些形态特征,包括质膜对称性和附着性丧失、细胞质和细胞核凝缩以及DNA核小体间裂解。FITC Annexin V染色是在膜完整性丧失之前,伴随着凋亡和坏死引起的细胞死亡的最新阶段。因此,通常将FITC Annexin V染色与活性染料(如碘化丙啶(PI))结合使用,以鉴定早期凋亡细胞(PI阴性,FITC Annexin V阳性)。细胞膜完好的活细胞会排除PI,而死亡细胞和受损细胞的细胞膜可渗透PI。让我们确定用您的复方进行的治疗是否包括样本中的凋亡,并接收有关每个样本中存活、凋亡和死亡的细胞百分比的数据。我们的流式细胞仪团队可以对多种类型的样本(例如培养的细胞、血液或组织)进行凋亡分析,并且如有需要,可以分析每个样本中特定的细胞亚群。

通过流式细胞仪检测细胞周期
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当用荧光DNA结合剂(如碘化丙啶(PI))对细胞的DNA染色时,可以通过流式细胞仪测量细胞中DNA的相对量,因此可以阐明细胞周期的阶段。在G0或G1期间,一个细胞包含46条染色单体。在S阶段,染色体复制,而在S阶段结束、G2或M阶段,有92条染色单体。使用这种方法可以确认细胞周期检查点抑制剂的作用。我们的流式细胞仪专家能够使用上述方法确认细胞周期检查点抑制剂的作用,并确定样本(例如培养的细胞、血液和组织)中处于细胞周期不同阶段的细胞百分比。

通过流式细胞仪检测细胞活性和增殖
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普遍存在的细胞内酯酶活性和完整的质膜是活细胞的显著特征。通常使用一种胺反应性荧光染料进行常规的简单活性分析,该染料无法渗透活细胞,但可以渗透膜受损的细胞。因此,它可用于通过流式细胞术评估哺乳动物细胞的存活与死亡状态。这种检测方法比台盼蓝染料排除法更为灵敏,台盼蓝染料排除法通常用于活/死细胞鉴别。通过治疗或不同的程序检测随时间推移样本中细胞的活性。将细胞活性测定与其他流式细胞仪测定(例如细胞周期测定或特定蛋白质丰度分析)结合使用以排除死亡细胞分析。流式细胞仪团队还拥有使用CFSE染色法测量混合淋巴细胞反应中T细胞增殖的经验。

通过磷酸流式细胞计量术进行细胞内信号转导
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我们还提供磷酸流式细胞计量术,这是一种用于筛选新药对体外细胞信号通路激活作用的重要工具;并且具有通过将该技术与免疫表型细胞表面标记物相结合来区分不同细胞亚群中的分析而在体外测量药物作用的能力。 该平台使用荧光标记的抗体,这种抗体仅在调节其功能的特定氨基酸残基上被磷酸化时才能识别蛋白质。磷酸流式细胞计量术的数据具有高度的一致性和可重复性,这转而为细胞信号分析创建了一个独特的平台。  如要了解更多信息,请阅读我们与以下主题相关的博客:荧光流式细胞术用于筛查癌细胞和免疫细胞中的细胞内信号传导事件查看有关此主题的网络研讨会


细胞与组织处理

细胞分选

使用流式细胞仪进行细胞分选是一种特殊类别的流式细胞术。它提供了一种方法,可根据每个细胞的特定光散射和荧光特性,将生物细胞的异质混合物分类到两个或多个容器中(一次一个细胞)。细胞分选可以根据任何散射、荧光信号或两者的组合来分离活细胞。我们在分离活细胞与死细胞、表达特定荧光蛋白的细胞或表达特定表面标记物或一组表面标记物的细胞方面拥有丰富经验。分离后,细胞可进行培养和/或用于任何下游测定。我们还成功创建了多个单细胞克隆,这些克隆可表达来自多个细胞系的不同水平的特定蛋白质。我们与合作伙伴实验室开展合作,该实验室拥有多台细胞分选流式细胞仪,而且在以多种方式分选细胞方面拥有多年经验。

自动化组织处理以产生活细胞
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通过将机械解离与细胞外基质的酶促降解相结合,科文斯可以将组织解离为单细胞悬液,从而保持组织的结构完整性。通过将Miltenyi Biotech解离试剂盒与gentleMACS™Octo解离器结合使用,可以从人或小鼠原发性肿瘤组织或异种移植物中温和、快速、有效地产生单细胞悬液。该测定法已针对肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的高产性进行了优化,同时保留了细胞表面表位。解离的细胞随后可以用于培养、对内部/外部蛋白质标记物进行染色、使用细胞分选术进行分离,或用于许多其他下游检测。除了肿瘤组织之外,流式细胞仪专家还在分离多种不同组织(如脾脏、淋巴结、肺和皮肤)方面拥有多年经验。

自动化组织处理以产生蛋白质或DNA/RNA匀浆

科文斯可以提供冷冻蛋白质匀浆,其中含有一系列蛋白酶和磷酸酶抑制剂或以TRIzol®或RNAlater®形式存在的DNA/RNA匀浆。我们拥有BeadBlaster™ 24微管匀浆机,可以完全溶解、研磨和均质化从软组织到骨骼的各种生物样本。即便最难以均质化和最具抗性的样本也可被完全均质化。不锈钢管托最多可对24份样本进行经过优化的高速3D运动,从而在样本和微珠之间产生高能冲击,释放出细胞内容物。匀浆后,可将样本离心并收集上清液以进行进一步处理。


细胞培养

大规模培养
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科文斯可以促进细胞系生长和扩展,以便植入数百只小鼠中,或者按照您所需的细胞浓度将其置入所需数量的小瓶中冷冻。我们拥有14个CO2孵化器、三个全尺寸生物安全柜、两个自动细胞计数仪,以及在培养皿、烧瓶、滚瓶、旋转瓶和多层烧瓶中培养数百种不同细胞系的丰富经验。

细胞形态
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科文斯可以使用Olympus CKX53F倒置荧光相称显微镜和1.4MP CCD摄像头来监测培养细胞的细胞形态。在治疗之前、期间及之后、长时间或在植入前的特定时间查看细胞图片,以验证细胞是否正常生长。

细胞生长/致瘤性
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我们可以监测您的细胞的长期生长,并比较不同的细胞变体、在不同培养基中细胞的生长或使用不同治疗方法的细胞的生长。我们有两台Luna自动细胞计数器,可以准确区分活细胞和死细胞并对每个种群进行计数。我们的细胞培养团队拥有丰富经验,可以培养多种类型的细胞,包括肿瘤细胞、原代细胞和神经球。我们的团队还拥有执行集落形成测定的经验,可检测转化细胞的致瘤潜力以及蛋白质对体外转化细胞的肿瘤抑制作用。我们的流式细胞仪团队拥有使用CFSE染色监测混合淋巴细胞反应中受刺激的T细胞或T细胞增殖的经验。

高内涵成像分析
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科文斯具有使用Cytation 3成像酶标仪对细胞进行染色并获取荧光图像的能力。捕获图像后,我们会使用专门的软件对细胞核进行计数,对活细胞与死细胞进行计数,将染色细胞计为阳性与阴性,并测量图像中每种颜色的大小、圆度、面积、周长和强度。

支持图像的细胞系生成
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萤火虫(P. pyralis)萤光素酶是一种在D-萤光素存在的情况下产生生物性发光的酶。使用慢病毒转导系统将萤光素酶2(luc2)基因的DNA与嘌呤霉素抗性基因一起掺入细胞的基因组中。培养细胞时,将嘌呤霉素添加到培养基中,从而仅选择具有插入的荧光素酶基因的细胞。一旦将带有luc的细胞注射到小鼠或大鼠中并施用D-荧光素,就可以使用科文斯的IVIS® Spectrum体内成像系统检测产生的光。从稳定地转导细胞到选择转导的细胞,再到测量细胞的光输出,体外服务团队在执行流程的每个步骤方面都有丰富的经验。

阅读有关萤光素的博客文章

细胞毒性/增殖测定
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细胞毒性/增殖测定法被广泛用于筛选复方库中的细胞毒性。如果您对开发以快速分裂的癌细胞为靶标的治疗剂感兴趣,我们可以测试您的细胞毒性化合物。在您投资药物制剂之前,我们还可以从最初的高通量药物筛选中筛选“命中”,以查看有害的细胞毒作用。MI Bioresearch可以在您可选的超过400个细胞系中测量化合物的毒性。我们为每个细胞系和化合物提供图表和IC50值。


血液与血浆分析

全血计数

我们与一家实验室合作,该实验室专长于使用全血细胞计数(CBC)确定您研究血样中各主要成分的含量。

全血计数测试可测量血液的若干成分和特征,包括:

  • 红细胞

  • 白细胞

  • 血红蛋白

  • 红细胞容积

  • 血小板

  • 平均红细胞体积

  • 平均红细胞血红蛋白含量

  • 平均红细胞血红蛋白浓度

全血细胞计数显示,细胞计数异常增加或减少可能表明该动物患有潜在的疾病。

血液化学

血液化学测试或测试套组是一组测试,用于测量血液中从人体组织释放的或在某些物质分解(代谢)过程中产生的许多化学物质。血液化学筛查可提供有关动物总体健康的信息,有助于查找某些问题,并确定针对特定问题的治疗是否有效。我们与合作伙伴实验室合作,该实验室专长于研究单个成分或成分组的血液测试,例如包括以下内容的全面血生化:

  • 白蛋白
  • 碱性磷酸酶
  • 谷丙转氨酶
  • 谷草转氨酶
  • 血尿素氮
  • 胆固醇
  • 白蛋白
  • 碱性磷酸酶
  • 谷丙转氨酶
  • 谷草转氨酶
  • 血尿素氮
  • 胆固醇
药代动力学

药代动力学(有时缩写为PK)是药理学的一个分支,专门用于确定从外部对生物体给药后药物的归趋。目标物质包括药剂、激素、营养物质和毒素。其试图探索从给药之时到药物从体内完全消除这一过程中该药物的归趋。药代动力学描述了人体在给药后如何通过吸收和分布机制以及药物在体内的化学变化(例如通过代谢酶,如细胞色素P450或葡萄糖醛酸糖基转移酶)对特定药物产生影响,以及该药物代谢产物的排泄作用和排泄途径。药物的药代动力学特性可能会受到诸如给药部位和所给药的药物剂量等因素的影响。这些可能会影响药物的吸收率。我们与一家合作伙伴实验室合作,该实验室专门检测您特定组织中的药剂。


重点体外设备

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Attune™ NxT

声聚焦流式细胞术4激光器,16参数
Precision_Image0202_2016_1024-1

Precision™

微孔板样本处理和移液系统
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可提供其他标准技术。另外可提供定制化检测方法开发,以满足客户的个性化需求。

Typhoon 9410

带有蓝色激光模块的成像系统
Synergy2_Image0207_2016_1024-1

Synergy 2

多模式酶标仪
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Cytation™ 3

高内涵成像系统
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可提供其他标准技术。另外可提供定制化检测方法开发,以满足客户的个性化需求。

Luminex® 100™系统

分析物多路复用系统
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CKX53F

配备1.4MP CCD摄像头的倒置荧光显微镜
StepPlusOne_Image0204_2016_1024-1

StepOnePlus™

实时PCR系统
细胞培养冷藏箱

 

 

 

大规模细胞培养生产

配备14个孵化器和三个生物安全柜的生产设施

 

可提供其他标准技术。另外可提供定制化检测方法开发,以满足客户的个性化需求。